細(xì)胞庫的建立可為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定的細(xì)胞。細(xì)胞庫是生物制藥的源頭，是重中之重，對(duì)于生產(chǎn)或檢定用細(xì)胞庫，各國監(jiān)管機(jī)構(gòu)一般要求三級(jí)管理，即原始細(xì)胞庫(PCB)、主細(xì)胞庫(MCB)和工作細(xì)胞庫(WCB)。PCB負(fù)責(zé)提供種子細(xì)胞，經(jīng)過不斷的克隆、篩選和鑒定后，形成MCB，再通過傳代擴(kuò)增等過程，最終形成WCB，用于大規(guī)模的生物制品生產(chǎn)。如果穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株或者商業(yè)化的細(xì)胞株為引進(jìn)和購買的，也可以采用MCB和WCB組成的二級(jí)細(xì)胞庫管理。當(dāng)然，在某些特殊的情況下，也可以只選擇建立MCB一級(jí)細(xì)胞庫，但需經(jīng)過監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)，足見其對(duì)細(xì)胞質(zhì)量和藥品安全的嚴(yán)格要求。
PCB的數(shù)量是根據(jù)實(shí)際來計(jì)算的，每個(gè)品種可能都不一樣，需要考慮后續(xù)生產(chǎn)、檢定需要、保藏年限，檢測用數(shù)量、復(fù)檢頻率等，MCB和WCB凍存多少數(shù)量，根據(jù)需要確定，需保證后續(xù)生產(chǎn)、檢定足夠，即遵循“夠用原則"。
細(xì)胞庫建庫流程
干細(xì)胞療法已被證明是一種很有前途的創(chuàng)新療法，其中，間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)憑借低免疫原性、高增殖潛力以及免疫調(diào)節(jié)等特性被廣泛應(yīng)用研究。根據(jù)最新文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)，截至2023年，全球已有一千多項(xiàng)注冊臨床試驗(yàn)使用MSC療法，12種MSC療法獲得監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)商業(yè)化。未來，間充質(zhì)干細(xì)胞將在更多疾病的治療中發(fā)揮重要作用。然而，MSC細(xì)胞的凍存卻非易事，成功建立可靠的MSC細(xì)胞庫往往需要處理好各種操作細(xì)節(jié)，此外，MSC在超低溫環(huán)境下，代謝活性和黏附能力出現(xiàn)降低，細(xì)胞膜和細(xì)胞骨架發(fā)生變化。更為常見的是，MSC 經(jīng)過超低溫凍存，基本上都存在細(xì)胞活率下降問題，這對(duì)臨床治療效果有一定影響。
MSC作為種子細(xì)胞或者工作細(xì)胞，細(xì)胞凍存是繞不開的步驟。如ICH Q5D所述，防止外源因子污染，保證細(xì)胞在各個(gè)凍存管中均勻分布，保證復(fù)蘇細(xì)胞具有恒定而符合生產(chǎn)要求的活力，是細(xì)胞庫制備的三個(gè)基本要求。而目前國內(nèi)大部分生物制藥企業(yè)還是采用手動(dòng)的方式來進(jìn)行細(xì)胞灌裝，其存在細(xì)胞樣品與凍存液接觸時(shí)間長導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差使得細(xì)胞庫質(zhì)量差、大量的人工重復(fù)操作帶來的誤差以及染菌風(fēng)險(xiǎn)等問題，為了節(jié)省建庫的時(shí)間、提高細(xì)胞的一致性、降低污染風(fēng)險(xiǎn)、節(jié)省質(zhì)量控制的成本，需要一種可靠有效的細(xì)胞灌裝方法，本篇將為大家重點(diǎn)介紹高通量自動(dòng)化灌裝MSC細(xì)胞的解決方案—艾貝泰AbioFill V100細(xì)胞灌裝系統(tǒng)。對(duì)灌裝系統(tǒng)技術(shù)參數(shù)感興趣的粉絲可點(diǎn)擊此鏈接：新品上市丨AbioFill V100全自動(dòng)細(xì)胞灌裝系統(tǒng)
MSC細(xì)胞灌裝實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1.實(shí)驗(yàn)材料：
細(xì)胞：貼壁的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)
凍存液：90%FBS+10%DMSO
凍存管：Corning 430659(2ml,Ex)
AO/PI染色液
程序凍存盒等
2.儀器設(shè)備：
灌裝系統(tǒng)：AbioFill V100細(xì)胞灌裝系統(tǒng)
細(xì)胞質(zhì)量監(jiān)控：Countleader細(xì)胞計(jì)數(shù)儀FL1000
3.實(shí)驗(yàn)參數(shù)：
灌注模式：開蓋-灌注-封蓋
灌注流速：350μL/s
灌注體積：1000μL
4.灌裝視頻：
5.結(jié)果分析與討論：
MSC細(xì)胞上機(jī)前用30mL凍存液重懸(50mL離心管體系)，灌裝前細(xì)胞留樣進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，測得細(xì)胞活率為97.55%，細(xì)胞密度約1.15E6cells/mL。使用灌裝系統(tǒng)進(jìn)行24支凍存管灌注，灌裝體積為1mL/管，灌裝后取樣對(duì)24支凍存管的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并使用程序降溫盒在-80℃凍存此24支細(xì)胞。凍存24h后，37℃水浴復(fù)蘇，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
灌注前/后、復(fù)蘇后平均活率(左)與平均活細(xì)胞密度(右)柱狀圖(n=24)
灌注前/后、復(fù)蘇后平均活率與活細(xì)胞密度表(n=24)
經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)灌注前、后細(xì)胞活率與細(xì)胞濃度差異不大，復(fù)蘇后的細(xì)胞活率稍微有所下降，下降幅度約為3%，為可接受范圍?；盥氏陆悼赡芤?yàn)楣嘌b后取樣計(jì)數(shù)過程使細(xì)胞在常溫凍存液內(nèi)時(shí)間過長導(dǎo)致，縮短操作時(shí)間可以有效避免此活率下降。
以上實(shí)驗(yàn)證實(shí)，AbioFill V100全自動(dòng)細(xì)胞灌裝系統(tǒng)能自動(dòng)化、高效地灌裝MSC細(xì)胞，灌裝前后細(xì)胞質(zhì)量不受到影響，可以建立高質(zhì)量、均一性的MSC細(xì)胞庫，解決MSC細(xì)胞大規(guī)模凍存的工業(yè)化問題，促進(jìn)細(xì)胞治療行業(yè)的良好發(fā)展。
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